Cycleave® RT-PCR Influenza A (H1N1-2009) Virus Detection Kit

Cycleave® RT-PCR Influenza A (H1N1-2009) Virus Detection Kit
品牌	Code No.	包装量	价格	说明书
Takara	RR925	60 次	3,200 元

制品内容 (25 μl × 60次量，其中NP × 20次量，NA × 20次量，HA × 20次量)

1. 5×PrimeScript Buffer (for Real Time)*1	120 μl
2. PrimeScript RT Enzyme Mix Ⅲ*2	30 μl
3. H1N1-2009-NP R Primer (10 μM)	20 μl
4. H1N1-2009-NA R Primer (10 μM)	20 μl
5. H1N1-2009-HA R Primer (10 μM)	20 μl
6. 2×CycleavePCR Reaction Mix*3	750 μl
7. H1N1-2009-NP Primer/Probe Mix (FAM，ROX) (25×)*4	20 μl
8. H1N1-2009-NA Primer/Probe Mix (FAM，ROX) (25×)*4	20 μl
9. H1N1-2009-HA Primer/Probe Mix (FAM，ROX) (25×)*4	20 μl
10. RNase Free dH2O	1 ml
11. Easy Dilution Buffer (for Real Time PCR)*5	1 ml
12. Control RNA for H1N1-2009-NP (5×107 Copies/μl)	20 μl
13. Control RNA for H1N1-2009-NA (5×107 Copies/μl)	20 μl
14. Control RNA for H1N1-2009-HA (5×107 Copies/μl)	20 μl
*1 内含dNTP Mixture等。 *2 内含RTase、Inhibitor。 *3 内含TaKaRa Ex Taq HS，Buffer，Tli RNase H，dNTP Mixture和Mg2+等。 *4 内含内参照用模板、引物及探针，以及检测病毒用的引物和探针，应避光保存。 *5 是制作标准曲线时梯度稀释DNA或RNA标准品的稀释 液。模板DNA或模板RNA如果用水或TE稀释时， 由于受Microtube的吸附作用等原因的影响，往往不能准确地进行稀释，导致实验结果精度降低。使用本制品，即使稀释至低浓度也能够进行准确稀释，容易在宽广范围内获得准确定量的标准曲线。EASY Dilution (Code No.: 9160) 也可以单独购买。

制品说明

2009年4月25日，世界卫生组织首次向全球发出甲型H1N1流感疫情的通报，截至5月末，疫情迅速在墨西哥、美国、加拿大等近50个国家蔓延，引起了人类的高度重视。2009年新型H1N1流感病毒属A型 (甲型) 流行性感冒病毒，含3种病毒的核酸序列，这3种病毒分别是猪流感病毒、禽流感病毒、人类甲型流感病毒。
本制品是采用Cycling Probe法快速特异性检出2009年甲型H1N1流感病毒的Real Time RT-PCR试剂盒。针对甲型流感病毒具有变异性强的特点，分别在2009年甲型H1N1流感病毒的NP基因、NA基因和HA基因上设计特异性检测的Cycling Probe，以防止病毒突变而导致的假阴性结果。本试剂盒使用具有较强延伸能力的PrimeScript RTase将病毒RNA反转录为cDNA，然后使用Hot Start DNA聚合酶TaKaRa Ex Taq HS扩增cDNA，此步骤与Cycling Probe法相结合，灵敏度高、特异性好，可以对2009年甲型H1N1流感病毒NP基因、NA基因和HA基因进行简单快速的实时检测。制品中病毒检测用的Cycling Probe使用了FAM标记，内参照使用了ROX标记，可以进行两色荧光的双通道同步检测。对内参照反应的检测，可以用以监控反应是否正常进行，防止假阴性结果的发生。
制品中的DNA聚合酶使用了Hot Start法用DNA聚合酶TaKaRa Ex Taq HS，可以有效抑制非特异性的PCR扩增，大大提高了PCR的检测灵敏度。使用本试剂盒中的Positive Control RNA制作标准曲线，可以对低至10 Copies的病毒进行定量分析。

保存

-20℃。

注意事项

1. Influenza A (H1N1-2009)病毒具有高度传染性，样品的采集、处理、保存、运输、检测实验均应遵循国家相应的管理规定和生物安全条例。必须做好相关的保护措施，以确保实验人员安全。
2. 本试剂盒检测灵敏度高，为了防止污染，实验要分区操作。
① 第一区：反应液配制区。
② 第二区：样品制备区。
③ 第三区：样品添加区及反应检测区。
   三个区间必须进行物理性隔离，避免人为因素造成污染。 
3. 本试剂盒所使用的Positive Control RNA是通过人工合成DNA后，再经体外转录得到的。使用安全，无感染性。
4. 为了防止Control RNA分解，应尽量避免反复冻融，若条件允许，请尽量于-70℃～-80℃保存。
5. 荧光标记探针应避光保存。
6. 当同时需要进行数次Real Time RT-PCR反应时，应先配制各种试剂的混合液，然后再分装到每个反应管中。这样，可使所取的试剂体积更准确，减少试剂损失，避免重复分取同一试剂。同时也可以减少实验操作或实验样品之间产生的误差。
7. 使用PrimeScript RT Enzyme Mix III、2×CycleavePCR Reaction Mix时，应轻轻混匀，避免起泡；分取之前要小心地离心收集到反应管底部；由于酶保存液中含有50%的甘油，粘度高，分取时应慢慢吸取。
8. 配制PCR反应液时应避免强光照射。
9. 反应液的配制、分装请一定使用新的 (无污染的)枪头、Microtube等，尽量避免污染。
10. 本试剂在反转录时不能使用Random Primer，因为Random Primer能和Cycling探针互补，Cycling探针将被切断。