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Bacterial 16S rDNA Clone Library Construction Kit 品牌 Code No. 包装量 价格 说明书 Takara R160 20 次 2,000 元
制品内容（20次量）
1. Tks Gflex DNA Polymerase*1 (1.25 units/μl) 40 μl 2. 2×Gflex PCR Buffer (Mg2+, dNTP plus)*1 1,000 μl 3. pBackZero-alpha linear vector*2 (50 ng/μl) 20 μl 4. 16S-FA/16S-R3 PCR primer Mix*3 (10 pmol/μl each) 40 μl 5. DNA Ligation Kit ＜Mighty Mix＞*4 150 μl 6. sequencing primer BlaM1 (10 pmol/μl) 30 μl 7. sequencing primer BlaRV (10 pmol/μl) 30 μl 8. DNA free H2O 1 ml×2 9. Positive Control DNA*5 (1 ng/μl) 10 μl *1 与Tks Gflex DNA Polymerase（Code No. R060A）中含有的酶和Buffer相同。PCR反应40次量。可进行20次检测样品的扩增反应和各10次阳性对照和阴性对照反应。
*2 在多克隆位点被切断为具有平滑末端的线性载体。
*3 16S-FA/16S-R3 PCR primer Mix 是在扩增16S rDNA的通用引物27f和1492r的5’末端附加了碱基序列的引物。本试剂盒不能使用没有附加碱基序列的通用引物27f和1492r。
*4 与DNA Ligation Kit ＜Mighty Mix＞（Code No. 6023）相同。
*5 在大肠杆菌JM109的基因组DNA两端附加了16S 27f/1492r primer序列后克隆的质粒DNA。使用16S-FA/16S-R3 PCR primer Mix进行PCR时，扩增片段大小为1068 bp。可进行10次阳性对照反应。
制品说明
本制品是基于有效进行环境细菌群落结构分析法之一的16S rDNA 克隆文库法而独自研发的16S rDNA克隆文库构建系统。可对环境细菌基因组DNA的16S rDNA的特定区域进行PCR扩增，高效克隆后构建克隆文库。
本制品中的PCR酶使用了可对粗提样品进行良好扩增的Tks Gflex DNA Polymerase，使用的载体是无需筛选阳性克隆的Positive Selection型pBackZero-alpha载体。因此，同传统的利用TA克隆构建的16S rDNA克隆文库相比，可更高效地制作文库。
使用本制品克隆效率在5×105 cfu/μg以上（注），不需要进行蓝白筛选可获得99%以上的阳性克隆。尽管本制品是平滑末端克隆，但获得的克隆99%以上都是插入片段为同一方向的克隆子，因此，利用载体上的序列作为引物可进行定向测序，也可对从PCR引物开始的碱基序列进行准确分析。
（注）克隆效率有时因实验条件不同会有所下降（比如E. coli感受态细胞的转化效率）。
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