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SWATH(Sequential Window Acquisition of all THeoretical Mass Spectra)是瑞士苏黎世联邦理工学院的Ruedi Aebersold 博士及其团队与AB SCIEX联合推出的一项全新的质谱技术。与传统的Shot-gun技术相比,SWATH采集模式能够将扫描区间内所有的肽段母离子经过超高速扫描并进行二级碎裂,从而获得完整的肽段信息。因而SWATH可以针对性研究感兴趣的蛋白质和肽段,数据具有全景式扫描,数据可回溯等优势。
技术流程
技术平台
Triple TOF 5600, Q-Exactive, Orbitrap Fusion™ Tribrid™
技术优势
灵敏度高,它继承了MRM的数据采集模式,结合高分辨率的Triple-TOF5600 plus质谱系统,具有与MRM相当的灵敏度;
重复样品间的定量相关性可达到0.99以上;
定量准确度几乎与MRM技术相当;
定量范围可跨越4个数量级;
定量的效果非常好。
应用领域
机理和调控机制研究
疾病标志物的筛选
用药及预后标志物筛选
疾病的分子分型
参考文献
Rapid mass spectrometric conversion of tissue biopsy samples into permanent quantitative digital proteome maps,Nature Medicine,2015,21:407–413
胶条/全谱分析送样要求
样品
样品要求
SDS-PAGE条带
考马斯亮蓝染色,条带清晰可见
蛋白质溶液
蛋白质总量≥20µg
组织样品
样品总量≥0.05g
细胞样品
细胞数目≥10E6
体液样品
血清≥200µL,尿液≥1mL,泪液≥1mL
备注
1、建议客户留有备份样品。
2、信息要求:提供物种和鉴定要求(蛋白质鉴定或翻译后修饰鉴定)。
3、保存要求:样品致于进口EP管中(国产EP管容易引入塑料峰的污染)。
4、运输要求:液氮或者干冰运输。
5、服务周期:10个工作日,数量大于20个的另外咨询。
iTRAQ/MRM/Label free/SILAC/SWATH/翻译后修饰分析送样要求
样本
样品要求
蛋白样本
每组样品300µg 蛋白质,重复的话翻倍,一般建议客户准备两份样品备用。
组织样本
按照蛋白质组织提取效率(蛋白:组织=7%),考虑提取后续验证研究样本方便,建议0.1g 左右或更多组织。
细胞样本
10E7个细胞,胰酶消化,按细胞冻存标准离心收集细胞即可。
体液样本
血清 200µL以上,脑脊液200µL 以上,尿液1mL ,泪液1mL.
转录组送样要求
样本
样品要求
组织样本
动物组织:>2g;
植物组织:>4g;
培养细胞:>1×107 个;
血液样品:≥ 2ml。
真核生物RNA
提供浓度≥ 200ng/μL,总量≥10μg的RNA(单次建库用量为5μg);OD260/280介于1.8 ~ 2.2之间,OD260/230 ≥ 2.0,RIN ≥ 6.5,28S:18S≥1.0。
原核生物RNA
提供浓度≥200ng/μL,总量≥10μg的RNA(单次建库用量为5μg);OD260/280介于1.8 ~ 2.2之间,OD260/230 ≥ 2.0,RIN ≥6.5,23S:16S≥1.0,
备注
1、确保RNA无降解;
2、送样时请标记清楚样品编号,管口使用Parafilm膜密封;
3、样品保存期间切忌反复冻融;
4、送样时请使用干冰运输。





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